熒光定量PCR防污染注意事項
瀏覽次數：123次 發布時間：2021-11-05
由于熒光定量PCR極其靈敏， 微量的污染就可能造成擴增體系的失敗， 而且污染極難去除， 因此在熒光定量PCR操作中應時刻避免可能的污染，操作要點如下：?
1.分區操作, 配體系和加陽性標準品和疑似樣品核酸與PCR擴增需在不同實驗室空間進行。
2.試劑專用，并以小份儲存。配制溶液時，應使用沒有接觸過本實驗室使用的DNA的新玻璃、塑料器皿和吸頭。溶液使用過后即丟棄。
3.普通PCR要避免在上述區域內操作，尤其是電泳環節等可能造成大量DNA外溢的操作。PCR擴增后，體系禁止開蓋，PCR擴增樣品禁止帶回實驗操作區。
4. 實驗時著一次性外科手術防護服，口罩， 帽子， 帶手套， 定期更換。
5.一切實驗操作使用專用移液器和帶濾芯的槍頭。?
6.用于加樣和配體系的加樣器要分開。
7.如果使用超凈臺加陽性模板時不要開風機。?
8.一些可能做成污染的危險操作，如陽性標準品的制備、包含有目標模板的陽性標 準品的克隆、電泳等操作、配制稀釋陽性標準品、陽性對照模板的制備都應事先在 其他實驗室操作完成， 上述實驗操作使用的裝備在熒光大量PCR操作中也要避免。?
9.配體系時，0.2ml排管和PCR管操作建議放置在干凈的槍頭盒（應在冰上）操作。
10.試驗過程中注意用潔凈的管蓋及時蓋住加入模板或陽性品的反應管，在大量試驗 和用96孔板加樣實驗時尤其要注意。?
11.使用專用的微量離心機。?
12.打開裝有反應物的離心管之前，先在離心機上短暫離心10秒鐘，使液體沉積至管 底，減少污染手套和移液器的可能性。?
13.不同樣品操作之間，懷疑有可能污染的環節要更換手套，（如冰箱內取試劑、搬移物件）。?
14. 試劑配制專用去RNA酶的水，實驗樣品和試劑要專屬放置特定冰箱層。
15.模板加樣順序為， 陰性對照， 疑似樣品， 陽性對照。
16.實驗結束后， 桌面水與84一比十比例擦拭，紫外260 nm燈照射2h， 實驗廢料及時清除。
注普通PCR的操作雖說防污染沒有熒光定量一樣嚴格，也應遵循上述操作要點的關鍵原則。
